發(fā)酵液可以用離心機處理
微生物發(fā)酵和細胞培養(yǎng)的目標產(chǎn)物主要有菌體、胞內(nèi)產(chǎn)物和胞外產(chǎn)物三類物質(zhì)。
從發(fā)酵液和細胞培養(yǎng)液中提取所需的生化物質(zhì),第一步就需進行預(yù)處理,以便于固液分離,使代謝產(chǎn)物后續(xù)的分離純化工序順利進行。其原因有三個方面:首先,發(fā)酵液多為懸浮液,粘度大,為非牛頓型流體,不易過濾,而所需的生化物質(zhì)往往只有分布在液相,才能有效地提純。并且,在有些發(fā)酵液中,菌體自溶,核酸、蛋白質(zhì)及其他有機粘性物質(zhì)這三類物質(zhì)會造成濾液混濁、濾速極慢,必須設(shè)法增大懸浮物的顆粒直徑,提高沉降速度,以利于過濾;其次,目標產(chǎn)物在發(fā)酵液中的濃度通常較低;此外,發(fā)酵液的成分復(fù)雜,大量的菌絲體、菌種代謝物和剩余培養(yǎng)基會對提取造成很大的影響。所以,對發(fā)酵液進行適當?shù)念A(yù)處理,從而分離細胞、菌體和其他懸浮顆粒(如細胞碎片、核酸以及蛋白質(zhì)的沉淀物),并除去部分可溶性雜質(zhì)和改變發(fā)酵液的過濾性能,是生化物質(zhì)分離純化過程中必不可少的首要步驟。
預(yù)處理方法要根據(jù)發(fā)酵產(chǎn)品、所用菌種和發(fā)酵液特性來選擇。大多數(shù)發(fā)酵產(chǎn)品存于發(fā)酵液中,少數(shù)存于菌體中,而發(fā)酵液和菌體中都有產(chǎn)物存在的情形也比較常見。如果目的產(chǎn)物是胞外產(chǎn)物,則通過離心或過濾實現(xiàn)固液分離,使其轉(zhuǎn)入液相;而對于胞內(nèi)產(chǎn)物而言,收集細胞是預(yù)處理的首要一步。細胞經(jīng)破碎或整體細胞萃取使目的產(chǎn)物釋放,轉(zhuǎn)入液相,再進行細胞碎片的分離。如果所需的產(chǎn)物為細胞,離心或過濾所得固相經(jīng)干燥等過程就可得到菌體。
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